1 一般法该法主要是满足细胞形态的一般观察。样品处理时使用自制橡胶刮子将贴壁细胞从培养瓶或培养皿上轻轻刮下来。刮下的细胞呈条状悬浮在培养液中, 将含有细胞的液体倒人尖底离心管, 以8度角的速度离心8 一10 m in , 吸去上清液。其余步骤均与以上制样相同。

　　2 原位包埋法要观察特定的某个细胞或者细胞之间的连接时, 必须使用原位包埋法。

　　3 细胞培养在载玻片上: 可将细胞连同载玻片一起进行各步骤。有细胞的一面朝上与液体直接接触。包埋前一定要在光学显微镜下选好被观察的细胞区域。包埋有两种方法: 倒扣法(将装满树脂的胶囊倒扣在长有细胞面的载玻片上); 顶扣法(长有细胞面的载玻片倒扣在灌满树脂的胶囊上)。聚合后的块在80 ℃加热器上加热5 一10 ha n , 即可从载玻片上册下胶囊。聚合好的样品块其表面光滑、透亮、无气泡, 在相差显微镜下可以看见特定的细胞。切片和染色均与以上制样相同。

　　4 细胞培养在塑料培养皿中

　　(1) 样品制备及准确定位: 按常规制样方法在培养皿中进行固定、脱水、浸透、包埋和聚合。聚合后的样品块必须先定位后再修块。在相差显微镜下找到要观察的特定细胞, 用刀片或解剖针在样品块的树脂面上画一个"井"字, 要观察的细胞在"井"字的正中间, 井字中间的"口"字大小可以切超薄切片为标准。最好在"井" 字的周围用Ma rk 笔再做一个记号, 以便核对细胞的位置。

　　(2) 修块: 用剪刀剪去塑料培养皿后, 在相差显微镜下很难再找到细胞。按"井"字划痕范围, 剪掉多余的树脂。由于块太小可以用钳子夹住样品块进行操作。注意不要用钳子直接夹细胞, 否则会在细胞面上留下夹痕。

　　(3) 粘样品及聚合: 取一个废包埋块做样品托, 锉掉原有组织, 用E 不幻n 8 1 2 树脂将修好的块粘到样品托上。如果把细胞面朝下粘, 由于细胞小且少, 难以掌握切到细胞的时机; 树脂与样品之间如留有气泡, 聚合后就形成空洞影响切片和样品的牢固性, 因此宜将有细胞的一面朝上。60 ℃ 聚合24 ho

　　(4) 再修块、切超薄切片和重金属染色: 均与常规制备相同。